Ваша вышивка будет соответствовать изображению, анонсирующему каждую схему .
Основная особенность наших наборов — максимальное соответствие скрина схемы (цветного компьютерного изображения схемы) и последующего отшива.

Сравнительный анализ Исходник-Скрин-Отшив,
который проводится нашими специалистами перед добавлением набора в ассортимент, гарантирует максимально возможное соответствие вашей вышивки оригинальной картине, с учетом всех особенностей вышивки крестиком как средства воспроизведения предметов живописного искусства.

В нашем магазине мы предлагаем Вашему вниманию реальные фотографии вышитых картин по каждому набору (сайт пополняется новыми фотоизображениями отшивов по мере их появления).

Наборы для старательных и терпеливых вышивальщиц
Важной задачей дизайнеров является стремление к выпуску качественных живописных схем в минимально возможном размере. Однако живописное полотно нельзя уместить в размер носового платочка, и минимальный размер для таких схем – 250-300 крестиков, а размер в 500 крестиков считается средней нормой.

Сложность вышивания всех схем примерно одинакова, но надо иметь в виду, что портреты и натюрморты вышивать легче, чем пейзажи и жанровые сцены; большой вариант схемы (если есть) вышивать дольше, но проще.
Поэтому в нашем Магазине дизайны для вышивания классифицированы как:
умерено сложные
сложные
очень сложные и
особо сложные
Все вышесказанное не делает наши схемы невыполнимо сложными для вышивания, но требует внимания и занимает достаточно продолжительное время.

Значительно упростит и ускорит вышивание, а также поможет избежать ошибок в работе, наша специальная организация процесса — Оптимизаторы вышивки

Картины для наших наборов
Дизайнеры стремятся наиболее полно удовлетворять пожелания вышивальщиц по ассортименту тематик и жанров для вышивания. Наш Сундучок Мечт
Но предпочтение отдается схемам по мотивам живописных картин классического направления.

Мы приглашаем всех заинтересованных вышивальщиц принять участие в показе и обсуждении процесса отшива наборов на форуме сайта «Вышивка всерьёз и в радость»

Будем рады услышать Ваши замечания и предложения в процессе вышивки по комплектации наборов и по качеству схем (по блендам, четкости деталей, переходам цвета и пр.

А также пишите, рассказывайте и присылайте свои фото
непосредственно администратору на сайте Лавочки Фондучка
Перейти к ДИАЛОГУ

Внимание! Компания оставляет за собой право вносить изменения и доработки в схему и состав набора.

товары для вышивания, вязания и творчества

Умение создавать красоту своими руками — это талант, который требует от человека внимания, усидчивости и, конечно, вдохновения. Ручное творчество ценилось во все времена и сегодня все большую популярность набирают вышивка и вязание. Интернет-магазин для творчества Bobbin предлагает большой ассортимент товаров для рукоделия, которые помогут черпать вдохновение и придумывать новые идеи для своих работ.

Для вышивания

Мир вышивки не знает границ, в каждой культуре во все времена присутствовала своя уникальная техника и использовались подручные материалы. Современные рукодельницы отдают предпочтение вышивке крестиком и гладью, гобеленам и вышивке в ковровой технике. Крестом вышивают замысловатые орнаменты для подушек, скатертей и салфеток; создают красочные пейзажи и портреты. Эта техника используется современными мастерицами, любительницами бискорню – маленьких игольниц-игрушек. Гладью вышивают красивые картины и украшают одежду — техник много, достаточно выбрать свою.

Рукодельницы с опытом едины во мнении, что начинать лучше с простых наборов для вышивания. Магазин для рукоделия и творчества Боббин предлагает недорогие наборы для вышивки в любой технике, которые будут понятны новичку. Подробные схемы помогут грамотно выбрать цвет бисера или ниток, а освоив азы, можно переходить к более сложным схемам или вышивать, самостоятельно подбирая оттенки.

Магазин товаров для творчества предлагает любительницам вышивки:

• Канву
• Мулине
• Бисер
• Аксессуары

Для любительниц вышивки в магазине можно найти все, начиная с иголки и наперстка и заканчивая удобными пяльцами, рамами и станками.

Для вязания

Если раньше вязание было традиционным женским занятием, то сегодня это — творческое хобби большинства рукодельниц. Мода диктует свои правила, внешний вид и качество конечного изделия во многом зависит от выбора используемой пряжи (цвета, фактуры, толщины нити), грамотно подобранных спиц или крючка.

Сайт-магазин для творчества Bobbin предлагает любительницам вязания:

• Оригинальную пряжу для вязания изделий крючком и спицами
• Инструменты
• Аксессуары
• Бирки, ярлычки

В каталоге магазина можно подобрать нежную и мягкую Ангору для ажурного вязания, пушистый Мохер для теплых вещей, Пехорку для вязания детских вещей и многое другое. Мы работаем только с проверенными производителями пряжи, среди которых: ALIZE, Color city, Nako, Vita, YarnArt, Пехорский текстиль.

Все для творчества и рукоделия в интернет-магазине Bobbin

Научиться владеть навыками вышивки, вязания, создания картин в стиле пэчворк, авторских кукол и многого другого поможет широкий ассортимент товаров, представленный в каталоге интернет-магазина.  У нас действует уникальная программа «Клуб друзей», которая позволяет получать значительные скидки и накопительные бонусы.

Наши преимущества:

• Широкий ассортимент
• Качество
• Доступные цены
• Удобные способы оплаты
• Быстрая отправка заказов
• Скидки, бонусы

Творить — это прекрасно! Создавайте красоту своими руками, а мы вам в этом поможем!

Швейный мир — сайт о вышивке и шитье

Свежие публикации

Показать ещё

Популярные публикации

• Кройка и шитье 28. 11.2019 Бралетт выкройка: как сшить лифчик бра из кружева своими руками, выбор фурнитуры
• Кройка и шитье 29.11.2019 Швейная машина чайка 134 а: настройка и регулировка, инструкция по эксплуатации
• Кройка и шитье 29.11.2019 Как правильно пришить шевроны на форму охранника и где их нужно разместить
• Как заштопать дырку на ткани незаметно вручную: на коленке, диване или носках
• Пошив авточехлов на автомобиль: как сшить на сиденья своими руками
• Кройка и шитье 29. 11.2019 Как на ткани вышить буквы: создание инициалов, имя или надписи на одежде
• Выкройка женских шорт с завышенной талией: как сшить своими руками
• Кройка и шитье 29.11.2019 Состав ткани: что за ткань pes, linen, wool, таблица сокращений и обозначений
• Выкройка единорога: как сшить из ткани, из фетра своими руками для начинающих
• Полиэстер, вискоза, эластан: что за ткань, разница, что лучше для одежды
• Все выкройки тильда на куклу: как сшить игрушку своими руками из ткани
• Как сшить тюрбан (чалму) своими руками: выкройка и схемы из ткани
• Ткани и полотна 28. 11.2019 Буфы своими руками для начинающих: схемы и расчет ткани на изделие
• Французский узелок в вышивке крестом: как сделать для начинающих, пошагово
• Выкройка для юбки с запахом: как сшить своими руками быстро, для начинающих

крест с изображением Сергия Радонежского нашли в центре Москвы / Новости города / Сайт Москвы

Необычный артефакт обнаружили московские археологи. Деревянный нательный крест с изображением покровителя всех учащихся — святого Сергия Радонежского — нашли во время раскопок в районе Китайгородского проезда, недалеко от парка «Зарядье» и Москвы-реки.

Крест датируется концом XVII — началом XVIII века. На его лицевой стороне вырезано распятие, а на оборотной — фигура одного из самых почитаемых святых Русской православной церкви. Именно преподобный Сергий Радонежский благословил московского князя Дмитрия Донского перед Куликовской битвой (1380). Победа в этом сражении положила начало освобождению Руси от монголо-татарского ига.

«Деревянные нательные кресты были раньше очень распространены в Москве, но, к сожалению, их редко удается обнаружить при раскопках — дерево плохо сохраняется в грунте. Обычно археологи встречают медные, серебряные, золотые, даже каменные кресты и кресты из перламутра. Найденный недавно артефакт имеет довольно внушительные размеры — почти девять сантиметров в длину. Он не обладает большой художественной ценностью, но зато сохранился до наших дней в очень хорошем состоянии», — рассказал глава Департамента культурного наследия города Москвы Алексей Емельянов.

На одной из лопастей креста заметны следы ремонта — кусочек металлической проволоки, скрепляющей сломанные части. Это говорит о том, что владелец очень дорожил крестом. Лицевая сторона, которая соприкасалась с одеждой, стерта, вероятно, от продолжительной носки. А вот на оборотной стороне резьба сохранилась в мельчайших деталях — на фоне фигуры Сергия Радонежского даже можно разглядеть завитки, изображающие облака.

Сейчас артефакт находится в археологической лаборатории, где его изучают эксперты. Они пытаются определить породу дерева, из которой изготовлен крест. После реставрации старинный предмет передадут в фонды одного из столичных музеев.

Московские археологи регулярно находят предметы, хранящие память о жизни города и прошлых поколений. Специалисты изучают их состояние и определяют ценность, после чего принимают решение, как их сохранить.

Так, в августе во время раскопок вблизи Гоголевского бульвара археологи обнаружили порядка 500 фрагментов печных изразцов XVIII века. Керамические изразцы расписаны в монохромной технике оксидом марганца по белой эмали, который и придает изображениям редкий пурпурный оттенок. На них изображены ветхозаветные сюжеты и мифологические персонажи.

Тогда же специалисты нашли следы небольшой литейной мастерской, которая находилась недалеко от улицы Сретенки в XVII — начале XVIII века. До наших дней дошли фрагменты резервуара для воды — большой деревянной бочки, а также ремесленные инструменты. Это два керамических тигля — специальных горшка, которые использовали для первичной выплавки металла из руды, а также часть каменной литейной формы.

В районе Южное Медведково археологи обнаружили фрагмент верхней части резной белокаменной колонны и часть фигурки из бивня мамонта. Специалисты датируют эти находки XVIII веком. Вероятно, именно в это время из камня была высечена колонна, которая украшала фасад одной из усадебных построек. В том же столетии из средней части бивня мамонта была выточена и фигурка.

Весной специалисты нашли револьвер XIX века и милицейскую кокарду на Долгоруковской улице. Здесь же был обнаружен клад из 97 серебряных и медных монет времен правления Николая II.

Всего за последние восемь лет московские археологи нашли около 35 тысяч артефактов.

Московский ювелирный завод – официальный сайт

Самые выгодные условия покупки

Обратный выкуп

Вы можете вернуть свой камень в течение двух лет с даты покупки по выгодной цене. Цена определяется по соглашению сторон на основании предложения ОАО «МЮЗ».

Купив сертифицированные бриллианты, Вы можете изготовить ювелирные украшения под заказ.

Уникальный номер

Качество сертифицированных бриллиантов подтверждено Сертификатом соответствия.

Обмен с доплатой

На более дорогой камень. Более подробные условия уточняйте у продавцов.

Сшитые координационные полимеры {[Ru (bda)] xLy} n: на пути к эффективному гетерогенному катализу окисления воды в системе без органических растворителей

rsc.org/schema/rscart38″> В последнее время все большее внимание уделяется разработке полимерных катализаторов расщепления воды. В этом исследовании мы успешно разработали несколько новых сшитых координационных полимеров ( CCP s) по формуле {[Ru (bda)] _x L _y } _n в качестве эффективных гетерогенных катализаторов окисления воды в системе без органических растворителей, где Ru (bda) представляет собой каталитический центр.Подробные исследования каталитической кинетики окисления воды показали, что односайтовая нуклеофильная атака воды ( WNA ) является общим механизмом, применяемым к этим полимерным катализаторам, который отличается от низкомолекулярного эталона, [Ru (bda) (pic) ₂ ] (рис = 4-пиколин). Экспериментальные данные также указали на важность межфазной смачиваемости и наличия Ru (bda) -макроциклических фрагментов в полимерной сетке для определения общей каталитической активности. Что еще более интересно, модификация концевых заглушек через в реакции обмена пиридин / ДМСО дополнительно удаляет остаточный Ru (ДМСО) _x фрагментов на поверхностях полимерной сетки, что приводит к улучшенным характеристикам с впечатляющим TOF ∼4,6 с ⁻¹ и ∼750 TON в системе без органических растворителей, что превосходит [Ru (bda) (pic) ₂ ]. Скорость катализа одна из самых высоких для гетерогенной системы, о которой сообщалось на сегодняшний день.Электрохимическое исследование показало, что полимерные катализаторы также являются перспективными электродными материалами для электрокаталитического окисления воды, а электрод на основе CCP / Nafion / ITO сохраняет ~ 73% своей начальной активности после 27 циклов в оптимальных условиях.

У вас есть доступ к этой статье

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или уточнить у системного администратора.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файлах cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или уточнить у системного администратора.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файлах cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Программа приграничного сотрудничества Литва — Польша

ОТКРЫТА РЕГИСТРАЦИЯ НА ОТКРЫТИЕ ПРОГРАММЫ В ГДАНСКЕ

23.11.2016

От имени Министерства экономического развития Республики Польша мы рады пригласить вас на Заключительную конференцию по программе трансграничного сотрудничества ЕИСП Литва-Польша-Россия на 2007-2013 гг. И Конференцию по открытию Программа приграничного сотрудничества Польша-Россия на 2014-2020 годы , которая будет проведена как единое мероприятие 8 декабря 2016 года в Польской Балтийской филармонии в Гданьске, Польша (адрес: ул. Оловянка.1, Гданьск).

УРОКИ ХИМИИ НА ЗАВОДЕ ОЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД В ГОРОДЕ СКИРСНЕМУН

17.11.2015

11 ноября 2015 года ученики Скирснемунской основной школы Юргиса Балтрушайтиса Юрбаркасского района впервые посетили очистные сооружения сточных вод в Скирснемуне. Станция очистки сточных вод была оборудована в ходе реализации масштабного проекта № ILPR. 01.01.01-72-001 / 10-00 «Экологическое оздоровление реки Неман — строительство инфраструктуры сбора и очистки сточных вод в городе Скирснемуне в Юрбаркасе. район (Литва) и в городе Неман (Россия) ».

ПОЛЬША-РОССИЯ 2014-2020 — ПЕРВОЕ ЗАСЕДАНИЕ ОБЪЕДИНЕННОГО МОНИТОРИНГОВОГО КОМИТЕТА

29.03.2017

Торжественное заседание Совместного мониторингового комитета (СМК) Программы приграничного сотрудничества Польша-Россия на 2014-2020 годы состоялось 23 марта 2017 года в Янтарном (Калининградская область). Члены СМК приняли важные решения для надлежащей реализации Программы. Были утверждены Правила процедуры СМК и обсуждены документы, имеющие решающее значение для запуска первого конкурса предложений.

Социально-экономический анализ приграничного региона и SWOT-анализ выявили, что наиболее характерными чертами территории Программы являются: эксклавный характер Калининградской области, периферийный характер большинства (за некоторыми исключениями) территорий Программы. регионов как с европейской, так и с национальной точки зрения, а также наличие важных потенциалов развития, которые вряд ли связаны друг с другом. Все эти вышеупомянутые проблемы и вызовы в сочетании с возможными синергетическими эффектами более интенсивного сотрудничества создают хорошие возможности для развития трансграничных операций в будущем между Литвой, Польшей и Россией.

Использование файлов cookie Google Analytics на веб-сайтах

В этом документе описывается, как Google Analytics использует файлы cookie для измерения взаимодействия с пользователем на веб-сайтах, использующих analytics.js и gtag.js. Для файлов cookie, используемых как часть Google Analytics 4, прочтите этот документ

Обзор

Google Analytics — простой и легкий в использовании инструмент, помогающий владельцам веб-сайтов измерять, как пользователи взаимодействуют с контентом веб-сайта. Когда пользователь перемещается между веб-страниц, Google Analytics предоставляет владельцам веб-сайтов теги (библиотеки) JavaScript для записи информации о странице, которую видел пользователь, например URL-адрес страницы.

Библиотеки JavaScript Google Analytics используют файлы cookie HTTP, чтобы «запоминать», что пользователь делал на предыдущих страницах / взаимодействиях. с сайтом.

Google Analytics поддерживает три библиотеки (теги) JavaScript для измерения использования веб-сайта: gtag.js, analytics.js и ga.js. В следующих разделах описывается, как каждый из них использует файлы cookie.

gtag.js и аналитика.js — использование файлов cookie

Библиотека JavaScript analytics.js является частью Universal Analytics и использует собственных файлов cookie для:

• Выявить уникальных пользователей
• Ограничить частоту запросов

При использовании рекомендуемого фрагмента кода JavaScript файлы cookie устанавливаются на максимально возможном уровне домена. Например, если адрес вашего веб-сайта — blog.example.co.uk , analytics.js установит домен cookie на .example.co.uk .Параметр файлы cookie в домене самого высокого уровня позволяют проводить измерения поддомены без дополнительной настройки.

gtag.js и analytics.js устанавливают следующие файлы cookie:

Имя файла cookie	Срок годности	Описание
_ga	2 года	Используется для различения пользователей.
_gid	24 часа	Используется для различения пользователей.
_gat	1 минута	Используется для ограничения частоты запросов. Если Google Analytics развертывается через Диспетчер тегов Google, это cookie будет называться _dc_gtm_ .
AMP_TOKEN	от 30 секунд до 1 года	Содержит токен, который можно использовать для получения идентификатора клиента из службы идентификатора клиента AMP.Другой возможные значения указывают на отказ, запрос в полете или ошибку при получении идентификатора клиента из AMP Служба идентификации клиента.
_gac_	90 дней	Содержит информацию о кампании для пользователя. Если у вас есть связали ваши аккаунты Google Analytics и Google Ads, Google Ads Теги конверсии веб-сайта будут считывать этот файл cookie, если вы не отключите его. Узнать больше.

Настройка

Прочтите gtag. js Руководство по файлам cookie и идентификации пользователя, чтобы узнать обо всех способах изменения этих настроек по умолчанию с помощью gtag.js.

Прочтите руководство разработчика analytics.js по доменам и файлам cookie, чтобы узнать обо всех способах изменения этих настроек по умолчанию с помощью analytics.js.

Прочтите документ «Безопасность и конфиденциальность в Universal Analytics» для получения дополнительной информации об Universal Analytics и файлах cookie.

ga.js — использование файлов cookie

Библиотека JavaScript ga.js использует собственных файлов cookie для:

• Определите, какой домен измерять
• Выделите уникальных пользователей
• Ограничить частоту запросов
• Запомните количество и время предыдущих посещений
• Запомнить информацию об источнике трафика
• Определяет начало и конец сеанса
• Запомните значение пользовательских переменных на уровне посетителя

По умолчанию эта библиотека устанавливает файлы cookie в домене, указанном в документ . host свойство браузера и устанавливает путь cookie к корневому уровню (/) . Эта библиотека устанавливает следующие файлы cookie:

Имя файла cookie	Срок действия по умолчанию	Описание
__utma	2 года с момента установки / обновления	Используется для различения пользователей и сеансов. Файл cookie создан когда библиотека javascript выполняется и не существует Файлы cookie __utma существуют.Файл cookie обновляется каждый раз, когда данные отправлено в Google Analytics.
__utmt	10 минут	Используется для ограничения частоты запросов.
__utmb	30 минут с момента установки / обновления	Используется для определения новых сеансов / посещений. Файл cookie создан когда библиотека javascript выполняется и не существует __utmb cookie существует. Файл cookie обновляется каждый раз, когда данные отправлено в Google Analytics.
__utmc	Конец сеанса браузера	Не используется в ga.js. Набор для взаимодействия с urchin.js. Исторически этот файл cookie работал вместе с файлом cookie __utmb , чтобы определить, пользователь был в новом сеансе / посещении.
__utmz	6 месяцев с момента установки / обновления	Хранит источник трафика или кампанию, объясняющую, как пользователь зашел на ваш сайт.Файл cookie создан когда библиотека javascript выполняется и обновляется каждые время отправки данных в Google Analytics.
__utmv	2 года с момента установки / обновления	Используется для хранения данных пользовательских переменных на уровне посетителя. Этот файл cookie создается, когда разработчик использует метод _setCustomVar с пользовательская переменная на уровне посетителя. Этот файл cookie был также используется для устаревшего метода _setVar .Файл cookie обновляется каждый раз, когда данные отправлено в Google Analytics.

Настройка

Для настройки файлов cookie можно использовать следующие методы:

Прочтите руководство по отслеживанию нескольких доменов, чтобы узнать, как настроить ga.js для измерения взаимодействия с пользователем в разных доменах.

urchin.js — использование файлов cookie

Исторически Google Analytics предоставлял измерения с помощью JavaScript библиотека с именем urchin.js. Когда была запущена более новая библиотека ga.js, разработчики было предложено перейти на новую библиотеку. Для сайтов, на которых нет завершив перенос, urchin.js устанавливает файлы cookie, идентичные тому, что установлен в ga.js. Прочтите раздел об использовании файлов cookie ga.js выше Больше подробностей.

Google Analytics для медийных рекламодателей — использование файлов cookie

Для клиентов, которые используют функции рекламодателя в контекстно-медийной сети Google Analytics, такие как ремаркетинг, сторонний файл cookie DoubleClick используется в дополнение к другие файлы cookie, описанные в этом документе, только для этих функций.Для большего Информацию об этом файле cookie можно найти в разделе часто задаваемых вопросов о конфиденциальности рекламы в Google.

Эксперименты с контентом — использование файлов cookie

Для веб-сайтов, использующих эксперименты с содержанием Google Analytics, следующие файлы cookie используются для этих функций в дополнение к другим файлам cookie. описано в этом документе:

Оптимизация — использование файлов cookie

Для веб-сайтов, использующих Optimize, в дополнение к другим файлам cookie, описанным в этом документе, используются следующие файлы cookie:

Имя файла cookie	Срок годности	Описание
_gaexp	Зависит от продолжительности эксперимента, но обычно 90 дней.	Используется для определения включения пользователя в эксперимент и истечения срока его действия. был включен в.
_opt_awcid	24 часа	Используется для кампаний, связанных с идентификаторами клиентов Google Рекламы.
_opt_awmid	24 часа	Используется для кампаний, связанных с идентификаторами кампаний Google Рекламы.
_opt_awgid	24 часа	Используется для кампаний, сопоставленных с идентификаторами группы объявлений Google Реклама
_opt_awkid	24 часа	Используется для кампаний, сопоставленных с идентификаторами критериев Google Реклама
_opt_utmc	24 часа	Сохраняет последний параметр запроса utm_campaign .

Сшивание тирозином внеклеточного матрикса катализируется Duox, многодоменной оксидазой / пероксидазой, гомологичной субъединице оксидазы фагоцитов gp91phox | Журнал клеточной биологии

Высокомолекулярные гомологи gp91 phox, супероксид-генерирующей субъединицы никотинамид-аденин-динуклеотид-фосфат (НАДФН) -оксидазы фагоцитов были идентифицированы у человека (h) и Caenorhabditis elegans (Ce) и получили название Duox для «Двойная оксидаза», потому что они имеют как домен гомологии пероксидазы, так и домен gp91 pho x.Модель топологии предсказывает, что фермент будет использовать цитозольный НАДФН для генерации реактивного кислорода, но функция экто-пероксидазного домена была неизвестна. Ce-Duox1 экспрессируется в гиподермальных клетках, лежащих в основе кутикулы личиночных животных. Для исследования функции РНК-интерференция (РНКи) была проведена у C. elegans . Животные с РНКи демонстрировали сложные фенотипы, аналогичные описанным ранее, в мутациях в биосинтезе коллагена, которые, как известно, влияют на кутикулу, внеклеточный матрикс.Электронные микрофотографии показали грубые аномалии кутикулы животных с РНКи. В кутикуле коллаген и другие белки перекрестно сшиты посредством ди- и тритирозиновых связей, и эти связи отсутствовали у животных с РНКи. Экспрессированные пероксидазные домены как Ce-Duox1, так и h-Duox показали пероксидазную активность и катализируемое перекрестное сшивание свободного этилового эфира тирозина. Таким образом, Ce-Duox катализирует перекрестное сшивание остатков тирозина, участвующих в стабилизации кутикулярного внеклеточного матрикса.

Генерация реактивного кислорода хорошо охарактеризована в фагоцитах, где оксидаза респираторного взрыва (называемая никотинамидадениндинуклеотидфосфат [NADPH] ^* -оксидаза) катализирует НАДФН-зависимое восстановление молекулярного кислорода с образованием супероксида и вторичных метаболитов, включая перекись водорода (Babior, 1995). ).В фагоцитах генерация реактивного кислорода является устойчивой, и высокие уровни активных форм кислорода участвуют в уничтожении бактерий. В последние годы стало ясно, что нефагоцитарные клетки также генерируют реактивный кислород, хотя и на более низких уровнях (Cross and Jones, 1991). Происхождение и функция этого реактивного кислорода не ясны, и их по-разному приписывают «дырявому» митохондриальному дыханию, активности ферментов, таких как ксантиноксидаза, или самой НАДФН-оксидазе фагоцитов.В некоторых случаях реактивная система генерации кислорода имеет свойства, напоминающие оксидазу фагоцитов (Emmendorffer et al., 1993; Griendling et al., 1994), но часто бывает трудно продемонстрировать значительную экспрессию критических компонентов оксидазы фагоцитов в этих типы клеток (Emmendorffer et al., 1993), предполагающие существование одного или нескольких гомологов НАДФН-оксидазы фагоцитов.

НАДФН-оксидаза фагоцитов состоит из нескольких субъединиц, включая каталитическую составляющую gp91 phox (Babior, 1995; Yu et al. , 1998). В активированных клетках эта субъединица связана с плазматической мембраной (или с фагосомной мембраной, которая происходит от плазматической мембраны) и состоит из COOH-концевого флавопротеинового домена, содержащего сайт связывания NADPH (Rotrosen et al., 1992; Segal et al., 1992; Taylor et al., 1993; Takeshige and Sumimoto, 1994) и NH ₂ -концевой гидрофобной области, состоящей из пяти-шести трансмембранных α-спиралей и содержащих две гемовые группы (Cross et al., 1995; Nisimoto et al., 1995; Ю. и др., 1998). Структура фермента позволяет сочетать окисление внутриклеточного НАДФН с восстановлением молекулярного кислорода с образованием внеклеточного или фагосомного супероксида. Миелопероксидаза (МПО) секретируется внеклеточно или в фагосомы, позволяя активному кислороду, генерируемому оксидазой фагоцитов, поддерживать образование хлорноватистой кислоты во внеклеточном / фагосомном компартменте (Hampton et al., 1998; Nauseef, 1998).

Основываясь на гипотезе, что образование реактивного кислорода в нефагоцитарных клетках частично происходит от гомологов фагоцитарной оксидазы, мы провели поиск и молекулярно клонировали гомологи gp91 phox . Первый из них, Nox1 (также обозначаемый как Mox1, NOH-1), экспрессируется в нефагоцитарных клетках, включая эпителий толстой кишки и гладкие мышцы сосудов (Suh et al., 1999), и функционирует в регуляции роста клеток и трансформации клеток. Альтернативный сплайсинг Nox1 для генерации части мембранного домена продуцирует протонный канал (Banfi et al., 2000) со свойствами, подобными потенциалозависимым каналам. Недавно сообщалось о дополнительных гомологах gp91 phox , которые по размеру аналогичны gp91 phox (∼65 кДа) (Lambeth et al ., 2000; Cheng et al., 2001).

В настоящем исследовании мы описываем гомологи gp91 phox с большой молекулярной массой, называемые Duox, которые присутствуют в организме человека и C. elegans . Термин Duox, относящийся к двойной оксидазе, был принят Международным комитетом по номенклатуре генов Организации генома человека. Недавно сообщалось о частичной последовательности Duox2, названной p138 ^Tox , что относится к тироидоксидазе. Неожиданно оказалось, что эти гомологи содержат не только область гомологии gp91 phox на конце СООН, но также и концевую область NH ₂ , которая гомологична пероксидазам, включая МПО. Используя РНК-интерференцию (RNAi) в C. elegans , чтобы выключить экспрессию нематоды Duox1, мы обнаружили, что Duox участвует через перекрестное связывание тирозина в биогенезе кутикулы, коллагенового внеклеточного матрикса, который формирует внешнюю оболочку нематод. Реакция перекрестного связывания тирозина также была восстановлена ​​биохимически с использованием экспрессированных пероксидазных доменов человеческого (h) -Duox и Caenorhabditis elegans (Ce) -Duox1.

Поиск BLAST в геномной базе данных C. elegans с использованием в качестве запроса белковой последовательности gp91 phox выявил два гомологичных гена, содержащихся в космидах F56C11 и F53G12. Предполагается, что концептуальный транскрипт Ce-Duox1 (данные о последовательности доступны в GenBank / EMBL / DDBJ под номером доступа AF043697) до сплайсинга составляет 8197 п.н., он содержит 19 экзонов и кодирует белок из 1506 аминокислот.Клонирование кДНК для Ce-Duox1 (данные о последовательности доступны из GenBank / EMBL / DDBJ под номером доступа AF229855) выявило кДНК длиной 4491 п.н. (1497 аминокислот), которая несколько отличалась от концептуальной кДНК, полученной из структуры гена из-за неточности в предсказанных переходах интрон-экзон. Второй транскрипт, Ce-Duox2 (данные о последовательности доступны в GenBank / EMBL / DDBJ под номером доступа AF043697), предположительно составляет 5 308 п.н. до сплайсинга, содержит 16 экзонов и кодирует белок из 1313 аминокислот.Выравнивание по гомологии геномных последовательностей Ce-Duox1 и Ce-Duox2 позволило идентифицировать два новых 5′-экзона первого предсказанного экзона Duox2, которые были высоко гомологичны второму и третьему экзонам Duox1 (предсказанная структура кДНК доступна по запросу), но экзон Duox2, гомологичный экзону 1 Duox1, не может быть идентифицирован по гомологии. Предсказанные аминокислотные последовательности как Ce-Duox1, так и Ce-Duox2 обнаруживают примерно 30% идентичности с h-Duox1 и h-Duox2 (рис. 1 и рис. 2 A). Ce-Duox1 также содержит те же домены, что и h-Duox1 / 2 (см. Ниже), и имеет примерно такой же размер.Однако Ce-Duox2 содержит стоп-кодон, который должен устранить крайнюю COOH-концевую часть белка, которая включает сегмент сайта связывания пиридинового нуклеотида. Т.о., тогда как Ce-Duox2 должен содержать интактные пероксидазные и кальмодулиноподобные домены, не предполагается, что он кодирует функционирующий NADPH-оксидазный домен (Fig. 1). За исключением этой COOH-концевой области, Ce-Duox2 на 94% идентичен Ce-Duox1 на аминокислотном уровне. И Ce-Duox1, и Ce-Duox2 расположены ближе к концу хромосомы I, разделены всего 6 т.п.н. и в противоположных ориентациях.Высокая степень идентичности последовательностей и сохранение структуры интрона (неопубликованные данные), а также расположение обоих ближе к концу хромосомы согласуются с недавней дупликацией гена.

Доменная структура и трансмембранные области в gp91 phox , h-Duox1 / 2, Ce-Duox1 и Ce-Duox2 схематически представлены на рис. 1. Ферменты Duox гомологичны gp91 phox на своих COOH-концах (см. Http : // www.biochem.emory.edu/Lambeth/gp91_homology.pdf для выравнивания этих регионов). Nox1 (Suh et al., 1999), который имеет тот же размер, что и gp91 phox , более тесно связан с gp91 phox (идентичен на 54%), чем домен НАДФН-оксидазы hDuox1 или h-Duox2 (∼ На 26% идентично gp91 phox ). Однако h-Duox1 и 2 более тесно связаны с Ce-Duox1 в пределах НАДФН-оксидазного домена (идентичность ~ 39%). В пределах предполагаемых областей связывания флавинадениндинуклеотида (FAD) и областей связывания NADPH гомологи обладают значительно более высокой гомологией, в диапазоне от 60 до 90% в зависимости от области.Это включает каноническую спираль связывания динуклеотидов GXGXXP. В gp91 phox , Nox1, h-Duox1 и h-Duox2 за этой последовательностью следует F, который присутствует во многих НАДФН-специфичных флавопротеинах, тогда как в белках C. elegans F консервативно заменен на Y.

Duox имеют дополнительные области, которых нет в gp91 phox . Центральная область содержит две связывающие кальций последовательности EF-hand, как показано на фиг.1. Канонические остатки, участвующие в лигировании кальция, хорошо законсервированы в h-Duox1 и h-Duox2, но плохо консервативны в Ce-Duox1 и Ce-Duox2, что указывает на то, что функция этой области могла развиться вне связывания кальция у нематод.

Удивительно, но конечная треть белков Duox NH ₂ гомологична пероксидазам, включая МПО, пероксидазу эозинофилов, пероксидазу щитовидной железы, лактопероксидазу и овопероксидазу морского ежа (рис. 2, А и Б). В целом идентичность с пероксидазами во всем регионе составляет ~ 20%, но подобласти демонстрируют значительно более высокую гомологию. Ферменты Duox представляют собой отдельную группу в семействе пероксидаз (рис. 2 B), и филогенетически эта группа немного более тесно связана с овопероксидазами морских ежей. В пределах области гомологии пероксидазы только 2 из 12 остатков цистеина, участвующих в шести внутрицепных дисульфидных связях, которые консервативны в четырех гомологичных пероксидазах млекопитающих, присутствуют в белках Duox (рис.2 А). Кроме того, сайты гликозилирования, связанные с аспарагином, обнаруженные в MPO, не присутствуют в Ce-Duox1 или Ce-Duox2. Сайт связывания кальция в MPO (аспартат 263 и остатки 335–34; рис. 2 A, верхняя двойная черта) (Zeng and Fenna, 1992) хорошо консервативен в белках семейства Duox, включая три из четырех возможных остатков лигандирования кальция. (Рис. 2 A, ▴).

Крайняя 21 -конечная аминокислота NH ₂ Ce-Duox1 содержит последовательность секреторного сигнального пептида (рис. 1), подразумевая, что NH ₂ -концевой домен пероксидазы находится в компартменте, который является трансмембранным по отношению к цитозолю (например, внеклеточным или внутри секреторного пузырька). Кроме того, графики гидропатии показывают, что белки содержат высокогидрофобную область, соответствующую NH ₂ -концевой трети gp91 phox . Эта область может быть смоделирована как кластер из шести трансмембранных α-спиралей, как показано на рис. 1. Дополнительная трансмембранная спиральная область присутствует между доменом гомологии пероксидазы и кальмодулиноподобным доменом.

Клеточное расположение Ce-Duox1 определяли двойным окрашиванием антителами к Ce-Duox1 и мышечному маркеру миозину A (рис. 4, A и B). В продольном срезе иммуноокрашивание Ce-Duox1 наблюдали у личинок животных в виде «жемчужной нити» (рис. 4 A, зеленый) непосредственно на периферии мышц (рис. 4 A, красный). Ce-Duox1 (рис. 4 B, зеленый) также визуализировался непосредственно периферически по отношению к мышечным пучкам (красный) в плоскости поперечного сечения.Окрашивание Ce-Duox1 было значительно слабее у взрослых животных (неопубликованные данные). Вышеуказанная картина согласуется с локализацией Ce-Duox1 в гиподермальных клетках. Чтобы проверить эту локализацию, проводили двойное окрашивание антителами к Ce-Duox1 (рис. 4, C – H, зеленый) и к белку гиподермальных клеток Mh5 (рис. 4, C – H, красный). Рис. 4, C – E, показывает продольную плоскость, тогда как рис. 4, F и G, показывает плоскость поперечного сечения. Сравнение показывает, что экспрессия Ce-Duox1 и Mh5 происходит в одном и том же клеточном паттерне, хотя интенсивность окрашивания различается в разных областях слоя гиподермальных клеток.Объединенные изображения показаны на рис. 4, E и H, и показывают совместную локализацию во многих гиподермальных клетках. Иммуноокрашивание антителом к ​​Ce-Duox1, которое предварительно инкубировали с пептидом Ce-Duox1 (340–355) и антителами к антимиозину A, устраняло окрашивание в зеленом канале (неопубликованные данные), демонстрируя специфичность антител.

Чтобы получить представление о биологической функции ферментов Duox, мы использовали обратный генетический инструмент, РНКи, чтобы «нокаутировать» Duox в C.elegans (Fire et al., 1998). Этот метод включает инъекцию двухцепочечной РНК (дцРНК), кодирующей сегмент Ce-Duox1 или Ce-Duox2, в гонады гермафродитов C. elegans дикого типа. Затем животным, которым вводили инъекцию, давали возможность откладывать яйца, собранные яйца давали развиваться и потомство наблюдали на предмет фенотипов. Эта процедура специально снижает или устраняет экспрессию интересующего гена. дцРНК, соответствующие трем отдельным участкам Ce-Duox1 и Duox2, использовали в отдельных экспериментах.Первые два соответствуют областям идентичности между Ce-Duox1 и Ce-Duox2 и, как предполагается, блокируют экспрессию обеих форм Duox. Третья dsRNA соответствует крайнему COOH-концу Ce-Duox1, который не имеет аналога в Ce-Duox2 и, следовательно, блокирует только экспрессию Ce-Duox1. Все три формы дцРНК привели к одному и тому же диапазону фенотипов. В повторных экспериментах процент животных, проявляющих тот или иной фенотип, был несколько изменчивым, вероятно, из-за различий в количестве РНКи или месте инъекции.Однако в типичном эксперименте> 90% животных были затронуты одним или несколькими фенотипами. В типичном эксперименте фенотипы включали наличие больших поверхностных волдырей (рис. 5 B, ∼50% животных), невысоких или «коренастых» животных (рис. 5C, ∼35% животных) и животных с задержанными яйцами или личинки (неопубликованные данные). Кроме того, в то время как животные дикого типа имели темный вид,> 80% животных с РНКи были полупрозрачными (сравните дикий тип, рис. 5, A и D, животное справа с пораженными животными в D, животное слева и B и C).Около половины животных с РНКи показали неспособность двигаться на пластинах обычным змеевидным образом: пораженные животные были либо полностью парализованы, либо перемещались только в переднем отделе, очищая локализованный ряд Escherichia coli вблизи головы (рис. 5). , B и C).

Сходные фенотипы у C. elegans были описаны ранее и связаны с мутациями в пути биосинтеза коллагена (Levy et al., 1993; Групта и др., 1997; Джонстон, 2000). Несколько генов, которые кодируют коллагены кутикулы при мутации, приводят к Bli («волдырь»), Dpy («тупой», короткий толстый червь), Rol («ролик», спиральное движение вместо плоского синусоидального движения) или Sqt («приседание»). , ”Обычно роллы как личинки и коренастые как взрослые) фенотипы. Генетика этого процесса сложна, поскольку для некоторых генов разные мутации в одном и том же гене порождают разные фенотипы, а иногда фенотипы сочетаются (например, «пустышка»).У нематод коллаген вместе с несколькими другими белками обеспечивает основные компоненты кутикулы, внеклеточного матрикса, который действует как экзоскелет. В глобальном анализе экспрессии всех генов C. elegans с использованием массивов олигонуклеотидов (Hill et al. , 2000) Ce-Duox1 экспрессировался на низких уровнях (согласующихся с его исключительной экспрессией в гиподермальных клетках) в зависимости от стадии. . Экспрессия имела циклический характер, достигая пика во время эмбриональной стадии и через 36 часов, что соответствует пику экспрессии других генов (Johnstone, 2000), связанных с биосинтезом коллагена / кутикулы ( col-14 , dpy-2, -7 , -10 и sqt-3 ).Второй набор генов, связанных с коллагеном / кутикулой ( bli-1 , -2 , col-2, -6, -17, -35, -36, -37, -41 , dyp-13 , sqt-1 и rol-6, -8 ) также показывают пик экспрессии через 36 часов. Никакой значительной экспрессии Ce-Duox2 не наблюдалось ни на одной стадии. Таким образом, эти данные согласуются с функцией Ce-Duox1 в биогенезе кутикулы.

Сходство фенотипов среди животных с дефектом биосинтеза коллагена и кутикулы по сравнению с животными RNAi Duox предполагает, что Duox участвует в биогенезе кутикулы. Чтобы подтвердить эту гипотезу, ЭМ проводили на животных дикого типа и РНКи. Как показано на фиг. 6, кутикула животных RNAi Duox была сильно ненормальной. У нормальных животных (рис. 6А) четко видны три слоя кутикулы: кортикальный (внешний), средний и базальный (внутренний), как описано ранее (Cox et al ., 1981). Срединный слой состоит из распорок (рис. 6А, стрелки), соединяющих кортикальный и базальный слои с заполненным жидкостью пространством между этими слоями. Животные с РНКи (рис.6, B и C) часто демонстрировали разделение между кортикальным и базальным слоями с заметным расширением жидкостной полости и сломанными и растянутыми стойками, которые все еще видны на этих слоях (рис.6 Б, стрелки). Эти разделения произошли в основном над пучками мышечных волокон (рис. 6, B и C) и, вероятно, объясняют образование пузырей, видимых при световой микроскопии. Таким образом, структура кутикулы была сильно нарушена у животных RNAi Duox.

Перекрестное сшивание коллагена и других белков кутикулы у нематод происходит за счет ди- и тритирозиновых связей, которые связывают и стабилизируют белковую структуру (Fetterer and Rhoads, 1990; Fetterer et al. , 1993). Поскольку пероксидазы, такие как овопероксидаза морского ежа и МПО человека, осуществляют эту реакцию (LaBella et al., 1968; Malanik and Ledvina, 1979; Deits et al., 1984), мы предположили, что функция Ce-Duox1 (и, возможно, Ce- Duox2) должен генерировать тирозиновые поперечные связи, и что дефектная кутикула у Ce-Duox RNAi животных возникает из-за неспособности образовывать тирозиновые поперечные связи. Роль неизвестной пероксидазы в перекрестном связывании тирозина в Ascaris была предложена ранее на основании исследований, в которых активность перекрестного связывания тирозина ингибировалась с помощью ингибиторов пероксидазы 4-амино-2,3,4 аминотриазола, фенилгидразина и N -ацетилтирозин (Fetterer et al., 1993). Поэтому мы исследовали животных дикого типа и животных с нокаутом РНКи Ce-Duox1 / 2 на ди- и тритирозиновые связи. Профиль ВЭЖХ кислого гидролизата C. elegans дикого типа показан на рис. 7, кривая A. Первый большой пик был идентифицирован как дитирозин на основании сравнения с аутентичным стандартом и масс-спектральным анализом, а второй пик идентифицируется как тритирозин на основании его миграции при ВЭЖХ относительно дитирозина и масс-спектрального анализа. На основании площадей пиков и при условии эквивалентной ионизации дитирозин и тирозин присутствовали в соотношении 1: 200 у взрослых животных дикого типа.Кроме того, максимумы возбуждения / испускания флуоресценции были определены при щелочном и кислом pH и хорошо согласуются с ранее сообщенными значениями (Jacob et al., 1996). Масс-спектральный анализ очищенного материала кутикулы C. elegans и некутикулярного материала определил, что> 99,99% дитирозина и тритирозина находятся в материале кутикулы, поскольку дитирозин не обнаруживался в некутикулярной фракции (неопубликованные данные). Пики дитирозина и тритирозина отсутствовали в гидролизатах нематод Ce-Duox RNAi (рис.7, трасса Б). Таким образом, вмешательство в экспрессию Ce-Duox1 устраняет образование ди- и тритирозиновых связей.

Модель топологии, показанная на рис. 9, предложена для Duox на основе его первичной структуры и по аналогии с известными особенностями gp91 phox . В активированных фагоцитах gp91 phox неразрывно связан с плазматической мембраной. COOH-концевая половина gp91 phox гомологична известным белкам FAD (Rotrosen et al., 1992; Сегал и др., 1992; Sumimoto et al., 1992) и содержит предсказанный сайт связывания NADPH. Таким образом, эта область может складываться в отдельный внутриклеточный домен флавопротеидов. Gp91 phox также содержит NH ₂ -концевой гидрофобный домен, составляющий почти половину молекулы. Соответствующая область в Duox, по прогнозам, пересекает мембрану шесть раз (рис. 1 A), размещая как конец NH ₂ , так и конец COOH (присоединенный к домену флавопротеина) на цитозольной стороне.Некоторые особенности модели были проверены для gp91 phox . Например, модель помещает известные сайты гликозилирования на внешней стороне клетки (Wallach and Segal, 1997) и петлю связывания для цитозольного регуляторного белка p47 phox (Biberstine-Kinkade et al., 1999) на цитозольной стороне.

Домены гомологии gp91 phox в h-Duox1 / 2 и Ce-Duox1 / 2 демонстрируют тот же профиль гидропатии и предсказанные трансмембранные α-спирали, что и gp91 phox (рис.1, заштрихованные столбцы в области гомологии gp91 phox ). Поэтому мы предполагаем, что трансмембранная модель gp91 phox также применима к COOH-концевой части белков Duox. Такая модель предсказывает, что область, содержащая EF-руки, находится внутри ячейки. Присутствие последовательности сигнального пептида экспорта секреции на крайнем конце NH ₂ (рис. 1 A) и присутствие дополнительной предсказанной трансмембранной гидрофобной последовательности, расположенной между EF-доменом и доменом гомологии пероксидазы, позволяет предположить, что домен пероксидазы будет располагаться снаружи ячейки (рис.9). Хотя особенности этой модели должны быть протестированы напрямую, эта структура привлекательна, поскольку согласуется с генетическими и биохимическими данными, предполагающими участие Ce-Duox1 в генерации внеклеточных поперечных связей тирозина в белках кутикулы.

НАДФН-оксидаза фагоцитов служит моделью для функции домена гомологии gp91 phox Duox. Компонент gp91 phox оксидазы фагоцитов генерирует реактивный кислород вне клетки или в фагосоме (которая топологически внеклеточна).НАДФН снижает FAD в домене флавопротеина, и затем FAD пропускает электроны через две гемовые группы, расположенные внутри трансмембранного NH ₂ -конца gp91 phox , восстанавливая кислород с образованием супероксида вне клетки с вторичным образованием пероксида водорода. путем дисмутации. Такая функция была продемонстрирована для p138 ^Tox (Duox2), который был очищен как генерирующая пероксид водорода НАДФН-оксидаза из щитовидной железы (Dupuy et al. , , 1999).Эти авторы предположили, что функция p138 ^Tox обеспечивает H ₂ O ₂ тироидной пероксидазы, которая, как известно, йодирует предшественник тироидного гормона. Недавнее исследование (De Deken et al., 2000) идентифицировало домен гомологии пероксидазы в Duox1 и Duox2 (ThOX1 и ThOX2), но авт. Предположили, что этот домен был неактивным из-за отсутствия предполагаемых каталитически важных остатков.

Обычно считается, что окислительные реакции вредны для клетки, но результаты текущего исследования показывают, что окисление белков пероксидазами играет решающую роль в нормальной физиологии.Понимание функции домена пероксидазы Duox происходит из системы фагоцитов, в которой активация клеток сопровождается как активацией НАДФН-оксидазы фагоцитов, так и секрецией МПО. Перекись водорода, косвенно образующаяся НАДФН-оксидазой фагоцитов, соединяется с хлоридом в окислении, катализируемом МПО, с образованием хлорноватистой кислоты, разновидности, которая участвует в бактерицидных реакциях. В случае ферментов Duox как фрагмент НАДФН-оксидазы, так и фрагмент пероксидазы интегрированы в одну молекулу. Пероксид водорода, генерируемый гомологическим доменом gp91 phox в Duox, затем должен служить субстратом для пероксидазного домена. Для Ce-Duox1 косубстрат представляет собой белковые остатки тирозина, которые превращаются в ди- и тритирозин предположительно посредством реакции с участием тирозильного радикала на основе механизмов, установленных для других хорошо изученных пероксидаз; В результате рекомбинации тирозильных радикалов образуется ди- и тритирозин, что приводит к перекрестному сшиванию белков для стабилизации кутикулы нематод.Пероксидазы, включая МПО человека (Heinecke et al., 1993) и овопероксидазу морского ежа (Deits et al., 1984), катализируют это перекрестное сшивание тирозина, хотя в первом случае несколько неэффективно. Таким образом, предложенная топологическая структура Duox хорошо подходит для поддержки трансмембранной перекисной реакции с использованием внутриклеточных восстанавливающих эквивалентов НАДФН.

Прецедент вовлечения пероксидазы в структуру внеклеточного матрикса является результатом реакции оплодотворения в ооцитах морского ежа. Оплодотворение приводит к активации тирозинового сшивания внеклеточных белков в ооците, образуя защитную оболочку оплодотворения (Deits et al. , , 1984). Эта реакция катализируется овопероксидазой, пероксидазой, секретируемой ооцитом. В этой системе перекись водорода вырабатывается неизвестной НАДФН-оксидазой. Таким образом, в случае ооцитов морского ежа отдельные белки выполняют соответственно функцию образования пероксида и пероксидную функцию. Оболочки спор дрожжей также содержат дитирозиновые поперечные связи, которые образованы гемовым белком (Briza et al . 1996).

Ближайшими известными структурными гомологами h-Duox1 / 2 являются Ce-Duox1 и Ce-Duox2. И h-Duox1 / 2, и Ce-Duox1 демонстрируют одинаковую доменную структуру, включая домен гомологии gp91 phox , домен EF-hand и домен пероксидазы. В случае h-Duox1 / 2 критические кальций-связывающие остатки в домене EF-hand хорошо законсервированы, что указывает на роль кальция в регуляции активности фермента. Это было предложено для объяснения кальциевой зависимости активности НАДФН-оксидазы p138 ^Tox (Duox2) (Dupuy et al. , , 1999). Напротив, кальций-связывающие лиганды в областях EF-hand в Ce-Duox1 / 2 плохо консервативны, указывая тем самым, что кальций может не участвовать в этом сайте. Области связывания кальция в пероксидазном домене хорошо законсервированы как в Ce-Duox1 / 2, так и в h-Duox, что указывает на особую роль кальция, как было отмечено для других пероксидаз.

Сходство между пероксидазным доменом Ce-Duox1 и h-Duox1 / 2 повышает вероятность того, что их функция будет сходной. Пероксидазные домены h-Duox1 / 2 и Ce-Duox1 на 37% идентичны друг другу, тогда как пероксидазные домены белков Duox идентичны только на 19-20% с известными пероксидазами млекопитающих. Таким образом, среди известных пероксидаз или пероксидазных доменов h-Duox наиболее похож на Ce-Duox1, и это может означать сходные каталитические специфичности. Поддерживая эту идею, биохимические данные показывают, что рекомбинантно экспрессируемые домены пероксидазы от человека и C. elegans Duox способны образовывать ди- и тритирозиновые перекрестные связи. Это сохранение доменной структуры, последовательности и биохимической активности указывает на сходную функцию Ce-Duox1 и h-Duox1 / 2. Кроме того, наши данные, показывающие, что экспрессия Duox1 и Duox2 не ограничивается щитовидной железой, предполагают, что их функция не ограничивается специфической функцией щитовидной железы.В щитовидной железе пероксидазные домены h-Duox1 и h-Duox2 могут участвовать в йодировании тиреоглобулина, предшественника тироксина. Если это так, то эта функция дублирует функцию хорошо охарактеризованной тироидной пероксидазы (Taurog, 1999). Однако, поскольку другие ткани, в которых экспрессируется Duox1 / 2, лишены систем захвата йода, такая функция в этих тканях кажется маловероятной. Помимо йодирования, Duox у млекопитающих может также действовать в образовании эфирного мостика тироидного гормона, реакции, аналогичной синтезу пульхерозина.

Участвует ли Duox у млекопитающих в образовании тирозиновых поперечных связей? Сшивки дитирозина стабилизируют несколько типов внеклеточных матриксов, включая не только кутикулу нематод (см. Выше), но также резилин эластомера насекомых (Anderson, 1963), кутикулу насекомых (Locke, 1969; Hall, 1978; Klebanoff et al., 1979; Deits et al., 1984), хорионная оболочка яиц Drosophila (Georgi, Deri, 1976; Mindrinos et al., 1980), так и стенки акроспор дрожжей (Briza et al., 1996). Возникновение дитирозина и его возможная роль во внеклеточном матриксе в системе млекопитающих менее изучены. У млекопитающих дитирозин является маркером воспаления, как это имеет место в липопротеинах низкой плотности, выделенных из атеросклеротических бляшек (Leeuwenburgh et al., 1997). Предполагается, что дитирозин образуется во время воспаления под действием МПО, секретируемого воспалительными клетками (Zaitsu et al., 1981), или во рту с помощью лактопероксидазы слюны (Tenovuo and Paunio, 1979), но не исключены Duox-зависимые механизмы. Основным компонентом внеклеточного матрикса и базальной мембраны является коллаген, и ранее сообщалось, что коллаген млекопитающих содержит очень низкие концентрации дитирозиновых связей (~ 1 на 100 000 тирозинов) (Keeley et al., 1969; Waykole and Heidemann, 1976), в в дополнение к преобладающим поперечным сшивкам с участием лизинов и гистидинов. Однако такое перекрестное сшивание может быть неспецифически связано со старением или искусственно индуцировано во время подготовки образца. Дитирозиновые связи были выделены из других структурных белков и твердых тканей, таких как эластин (LaBella et al., 1967), фибрин и кератин (Raven et al., 1971) и белок катаракты хрусталика человека (Garcia-Castineiras et al., 1978). В эластине, хотя преобладающее поперечное сшивание включает лизин, было высказано предположение, что поперечные связи тирозина могут иметь решающее значение на ранних стадиях биогенеза эластина и что позже за этим следует обширное поперечное сшивание лизинов (LaBella et al., 1967 ). Низкие концентрации поперечных сшивок тирозина могут помочь упорядочить и выровнять эластиновые и / или коллагеновые фибриллы, выстраивая дальнейшее поперечное сшивание с высоким содержанием лизинов.Такая роль Duox человека привлекательна и согласуется с его экспрессией в легких, которые обладают высоким содержанием эластина. Насколько нам известно, дитирозиновые связи в базальной мембране или внеклеточном матриксе млекопитающих, кроме коллагена и эластина, не описаны, возможно, из-за отсутствия достаточного количества материала для анализа. Кроме того, еще одна перекрестная связь, катализируемая пероксидазой, образуется в результате дезаминирования лизил—аминогрупп белка с образованием лизилальдегидов, которые затем вступают в реакцию с аминокислотными остатками соседних молекул (Stahmann et al., ., 1977; Кларк и др. . , 1986; Hazen et al., 1997). Таким образом, также возможно, что h-Duox генерирует этот тип поперечных связей внеклеточного матрикса. Его трансмембранная природа и результаты исследований РНКи на C. elegans подтверждают гипотезу о том, что этот фермент участвует в образовании или модификации внеклеточного белкового матрикса.

Масс-спектрометрия была выполнена на тройном квадрупольном масс-спектрометре PerkinElmer sciex API 3000, оборудованном источником турбоионного распыления.Высушенный стандарт дитирозина (20 мг) восстанавливали в 200 мкл H ₂ O. Аликвоту 50 мкл разбавляли до конечного объема 1 мл 950 мкл 5 мМ ацетата аммония в МеОН и 1% уксусной кислоты. . Этот раствор вводили при скорости потока 5 мкл мин. ^-1 . Игла для распыления ионов поддерживалась при +550 и -4500 В для анализа положительных и отрицательных ионов соответственно. Эти эксперименты определили, что однократно протонированные (режим положительных ионов) и депротонированные (режим отрицательных ионов) частицы стандарта составляют m / z 361.3 и 359,3 соответственно, соответствующие прогнозу.

Общий белок, очищенная кутикула и общий белок за вычетом очищенных кислотных гидролизатов кутикулы из C. elegans и стандарт анализировали с помощью обращенно-фазовой ЖХ-МС / МС. Объем образца 50 мкл вводили в колонку Supelco Discovery C18 размером 15 см × 2,1 мм при скорости потока 300 мкл мин ^-1 . Растворитель A был 99: 1 H ₂ O по отношению к уксусной кислоте и растворитель B был 99: 1 MeOH к уксусной кислоте, оба содержали 5 мМ ацетат аммония.Колонку вливали непосредственно в источник ионов масс-спектрометра, работающего в режиме положительных ионов. Колонку предварительно уравновешивали 100% растворителем А в течение 6 мин с последующим вводом образца. Затем колонку промывали 100% растворителем A в течение 4 минут и элюировали 1-минутным линейным градиентом до 100% -ного растворителя B с последующей 4-минутной промывкой 100% растворителем B. Для этих экспериментов оба предшественника иона (как указано выше для дитирозина; m / z 540,4 / 538,4 для тритирозина) и структурно отличительных ионов распада. Контролируемые переходы для дитирозина включали потерю нейтрального вещества обеих групп COOH, потерю нейтрального вещества обеих групп COOH и одной группы NH ₂ , а также потерю нейтрального вещества обеих групп COOH и обеих групп NH ₂ ( m / z 269,4, 252,2 и 235,0 соответственно). Для тритирозина отслеживаемые переходы включали потерю нейтральной группы COOH, потерю нейтральной группы COOH и одной группы NH ₂ , потерю нейтральных двух концов COOH и потерю нейтральных двух групп COOH и двух NH ₂ групп ( m / z 494.3, 477,2, 448,2 и 431,2 соответственно). Кутикулу C. elegans очищали в соответствии с методами, разработанными ранее Cox et al. (1981).

Приблизительно 120 взрослых особей C. elegans дикого типа или с РНКи-пузырями собирали и промывали сначала буфером М9, а затем 0,1 М какодилатным буфером (pH 7,4). Животных осаждали, добавляли 1 мл 0,8% глутаральдейда, 0,7% тетроксида осмия, 0.1 М какодилата, pH 7,4, и инкубировали на льду в течение 1,5 ч с периодическим перемешиванием. Животных промывали 0,1 М какодилатным буфером, переносили на предметное стекло с углублением и разрезали пополам иглой 23-го размера. Разделенных животных переносили в пробирку, содержащую 1 мл свежего фиксатора (0,8% глутарового альдегида, 0,7% тетроксида осмия, 0,1 М какодилата, pH 7,4), и инкубировали на льду в течение 2 часов. После промывания 0,1 М какодилатным буфером разделенных пополам животных фиксировали в течение ночи на льду в 1% четырехокиси осмия в растворе 0.1 М какодилатный буфер. Животных промывали несколько раз 0,1 М какодилатным буфером, обезвоживали с использованием градуированных спиртов через оксид пропилена, инфильтровали и заключали в Embed-812 (электронная микроскопия). Перед полимеризацией при 60 ° C в течение 16 часов животных дразнили в параллельном положении с помощью зонда для ресниц. Срезы (0,5 мм) оценивали на ориентацию, и ультрасрезы (толщиной 800 Å) собирали на медных сетках 200 меш, окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца, и поперечные срезы исследовали с помощью электронного микроскопа Philips EM201.

Колумбийский университет — Департамент статистики Программы магистратуры

Как записаться на занятия

Обязанностью студента является соблюдение требований к выпускному экзамену и обеспечение того, чтобы советник факультета одобрял выбранные курсы перед регистрацией на каждый семестр. Если будут внесены изменения, графики следует пересмотреть еще раз.

Академический календарь GSAS указывает общие даты, на которые студенты могут зарегистрироваться.Система позволит студентам регистрироваться только в определенное время для регистрации на сайте Student Services Online (SSOL) (доступ осуществляется с помощью UNI и пароля). «REG APPTS» показывает назначенное время.

«Справочник курсов Колумбии» и «Вергилий» предлагают ключевую информацию о каждом классе, включая размер курса, предварительные условия и наличие каких-либо ограничений. Например, если курс не открыт для студентов GSAS, он не будет открыт для студентов, изучающих статистику магистратуры. Для получения дополнительной информации о процедурах регистрации студенты могут обратиться к странице регистрации GSAS.

Перед регистрацией студент должен связаться с назначенным им консультантом факультета для утверждения индивидуального списка курсов (лично или по электронной почте).

Регистрация в Высшей школе искусств и наук — это двухэтапный процесс, состоящий из регистрации как на отдельные классы, так и на полное или частичное проживание. Единица проживания (RU) — это категория регистрации, которая определяет размер платы за обучение.

ЗДЕСЬ — это видео, в котором описывается, как использовать SSOL для регистрации.ЗДЕСЬ — это видео об использовании Вергилия для планирования курсов и расписания.

Жилые дома

Ниже приведены категории единиц жилья для каждой из программ магистратуры. Для получения дополнительной информации о единицах проживания см. Также «Плата за обучение и сборы» и веб-сайт GSAS.

Студенты дневной формы обучения регистрируются в группе полного проживания (RU) в течение первых двух семестров и в группе длительного проживания (ER) в последнем семестре.

• Осень (Год Первый) — RU
• Весна (Год Первый) — RU
• Студенты могут выбрать летние курсы
Осень
• (второй год) — ER

Иностранные студенты со статусом F-1 должны пройти программу только за три семестра. Количество занятий в каждом семестре может меняться, если выполнены все требования. Всегда уточняйте в ISSO о международных и визовых вопросах.

Один RU или ER считается постоянным. Неполный рабочий день позволяет работать с QR (квартальное жилье) или HR (полу-жилье). ВСЕ Студентам магистерской программы требуется , чтобы завершить два RU, чтобы получить диплом.

После заполнения двух RU все студенты должны зарегистрироваться в ER. Можно зарегистрироваться в ER на более чем один семестр (например, летний семестр и осенний семестр).

Чтобы найти номер телефона для желаемого типа общежития, загляните в Справочник курсов Колумбийского университета под номером Ричард Слусарчик — (Асс. Декан по академическим вопросам, GSAS) , который будет указан в качестве «инструктора» для GSAS единицы проживания. Выберите правильную единицу и семестр.

Правила регистрации

Инструкции по регистрации см. В :

Сколько курсов?

• Количество пройденных занятий должно быть утверждено советником факультета.
• Чтобы оставаться в хорошей академической успеваемости (средний балл 3.0 и выше), рекомендуется посещать не более четырех классов в семестр, особенно в первом семестре.
• Студенты с визой F-1 должны зарегистрироваться для получения полного RU в течение первых двух семестров и ER после завершения двух RU.
• Полный RU или ER допускает любого баллов до двадцати баллов включительно.
• Студенты-заочники могут зарегистрироваться на QR или HR, если программа завершена в течение четырех лет и в общей сложности выполнено два RU.
• Большинство студентов дневной формы обучения должны планировать обучение на три полных семестра. Для завершения магистерской программы за два семестра требуется одобрение преподавателя-консультанта.

Какие уроки брать?

• Вот подробности о требованиях к программе Statistics MA.
• Вот утвержденные факультативы.
• Вот информация о перекрестной регистрации.
• Здесь представлены факультативные занятия, сгруппированные по интересам, таким как финансы, наука о данных, общественное здравоохранение, страхование или докторская степень.D. трек.
• Вот список курсов, которые не будут учитываться при получении степени магистра статистики.

Что делать, если класс «ограничен»?

• Это означает, что он закрыт для студентов-статистиков.
  • Найдите курс в Columbia Directory и просмотрите раздел «Open To».
  • Некоторые курсы открываются для дополнительных студентов позднее. Это часто можно найти в разделе «Примечания» курса.
• Вот информация о перекрестной регистрации в другие школы.

Что делать, если класс переполнен?

• SSOL — основной источник для всех регистраций, включая списки ожидания.
• Студент должен зарегистрироваться как можно скорее, чтобы попасть в электронный список ожидания.
• Ожидание — следующий шаг. В конце концов, просьба студента присоединиться к курсу будет либо принята, либо отклонена.
• Студенты не должны писать преподавателю по электронной почте, чтобы обойти других в списке ожидания.
• Нет необходимости обращаться к консультанту факультета, за исключением случая, когда требуется класс для выпуска в последнем семестре программы.
• Это полезное руководство для списков ожидания.
• Вопросы можно отправлять по адресу [email protected].
• Важно иметь запасной план, такой как альтернативный курс или другой раздел, который все еще открыт.
• , а не , оставаться в списке ожидания, если вас приняли в другой раздел того же курса.
• Если вы приняли участие в желаемом разделе, опустите все остальные разделы, чтобы открыть эти списки ожидания для других.

Жилая единица (RU) Статус

• Всегда проверяйте статус RU.
• Вопросы об обучении можно отправлять по адресу [email protected].
• Если общее количество баллов превышает двадцать, будет взиматься дополнительная плата.
• Если студенту необходимо перейти на более низкий RU, он должен сделать это вручную. Это не происходит автоматически, когда человек регистрируется на меньшее количество кредитов.
• Статистики Студенты магистратуры не могут регистрироваться более чем на пятнадцать баллов за один раз. Для регистрации более пятнадцати необходимо получить специальное разрешение.

Курсы должны иметь нормальную оценку для подсчета.

• Любой курс с оценкой P / F или R не засчитывается при окончании учебы.
• Четыре ОБЯЗАТЕЛЬНЫХ курса НЕ МОГУТ быть сданы / не пройдены.

Как добавить или удалить класс после регистрации:

• Первые две недели семестра называются «периодом изменения программы», потому что студенты могут добавлять и прекращать занятия в SSOL без штрафных санкций.
• Ваше расписание должно быть установлено в конце «Изменение периода программы».

• Обратитесь к Академическому календарю, чтобы узнать о сроках добавления / удаления и других сроках.
  • Никакие классы не могут быть отброшены после LAST DAY TO DROP . Никаких исключений.
  • Никакие классы не могут быть изменены на R или Pass / Fail после DEADLINE для изменения на PASS / FAIL или R.
• Крайние сроки для полусеместровых курсов отличаются, чтобы оставаться пропорциональными срокам для полных семестровых курсов:
  • Полусестровые курсы необходимо исключить в течение первых двух недель.
  • Крайний срок для сдачи / неудачи или кредита R — первый день пятой недели. (Помните, что основные классы не могут быть приняты для получения баллов Pass / Fail или R. Они также не могут быть приняты для получения более высокой оценки.)

• ЗДЕСЬ представляет собой информацию о периоде действия программы после изменения.
• Студентам, которые прекращают посещать курс без официального прекращения обучения, будет выставлена ​​оценка.

Форма корректировки регистрации (RAF)

Форма корректировки регистрации НЕ может использоваться для входа в класс, который отмечен как ОГРАНИЧЕННЫЙ в вашем расписании SSOL.Регистрационная форма (RAF) может использоваться только при следующих особых обстоятельствах:

• При перекрестной регистрации, когда в другой школе нет специальной процедуры. Форма должна быть доставлена ​​в главный офис GSAS, расположенный по адресу 107 Low Library, с подписью и UNI советника факультета, инструктора и, возможно, соответствующего администратора другой школы. Подтверждение распечатки электронной почты, приложенное к RAF, будет засчитано для подписи.
• При необходимости зарегистрироваться для получения более чем разрешенных пятнадцати кредитов для студентов-статистиков.
• Чтобы отбросить последний или единственный класс. Особый запрос следует направить в Управление по делам студентов по адресу 107 Low Library. В зависимости от конкретной ситуации требуется подать заявление на отпуск или отказ от участия.

При любых обстоятельствах RAF передается в 107 Low Library (GSAS).

Важные ссылки для регистрации

Перекрестная регистрация

Перекрестная регистрация всегда остается на усмотрение школы, программы и преподавателя курса.Департамент статистики не имеет никакого влияния на допуск вас к перекрестной регистрации. Перед попыткой перекрестной регистрации студенты магистратуры должны просмотреть утвержденный список факультативов и / или связаться со своим консультантом факультета, чтобы убедиться, что это класс, который они могут взять на зачет.

В некоторых аспирантурах есть собственные процессы перекрестной регистрации. Просмотрите ссылки ниже для получения информации о том, как пройти перекрестную регистрацию для этих школ. Для школ, не перечисленных ниже, обратитесь в конкретный отдел и узнайте о вариантах и ​​процессе перекрестной регистрации.

Допуск на любой курс не гарантируется. Все курсы доступны при наличии. Некоторые школы не позволяют ученикам проходить перекрестную регистрацию до первой недели занятий.

Ниже приведены ссылки для перекрестной регистрации в следующие школы:

студентов магистратуры могут зарегистрироваться на курсы TC при условии, что они получат разрешение от TC и их консультанта.

Перевод кредита

курсов по статистике в Колумбийском университете до поступления в M. Программа А. может засчитываться в счет степени магистра, если она одобрена директором программы и после окончательного рассмотрения Высшей школой. Согласно политике Департамента статистики, не более 4 классов (и максимум 1 RU), взятых в Колумбии до поступления на программу MA, могут быть поданы на получение степени MA. Ни один курс Колумбии не может применяться более чем к одной степени.

Когда предоставляется трансферный кредит, сопутствующие жилые единицы также могут быть зачислены на выполнение требования двух RU для M.Градус. Вот дополнительная информация о переводном кредите.

Студент может получить переводной кредит, выполнив следующую процедуру:

1. На веб-сайте GSAS есть форма для перевода средств. Вверху этой формы необходимо заполнить подпись студента в соответствующей строке.
2. Курсы должны быть указаны в пустом поле.
3. «Предыдущее учреждение» должно быть Колумбийским университетом, то есть местом, где проходили курсы.
4. Форма может быть передана или отправлена ​​по электронной почте координатору программы, который передаст ее директору для утверждения.
5. Директор программы определяет количество начисляемых баллов и RU.
6. После того, как форма была одобрена и подписана Директором, ее можно отправить в GSAS в 107 Low.

Курсов для получения степени R или сдано / не сдано

В течение семестра есть важные даты, которые нужно помнить, включая ПОСЛЕДНИЙ ДЕНЬ, чтобы ВЫБРАТЬ КУРСЫ, и ПОСЛЕДНИЙ ДЕНЬ для оценки R и ПРОЙДЕН / НЕ ПРОШЕЛ. Эти сроки строго соблюдаются. *

• Курсы, взятые на R или Pass / Fail, не засчитываются в степень магистра статистики.
• Базовые классы не могут быть приняты для R или P / F.
• Щелкните ЗДЕСЬ, чтобы получить дополнительные сведения об оценке «Годен / Не пройден».
• Не все курсы соответствуют критериям P / F или R.
  • Для P / F, проверьте в SSOL, чтобы узнать, соответствует ли курс критериям Pass / Fail, и выберите.
  Оценки
  • R должны быть одобрены инструктором курса. Вы должны договориться с инструктором.
• Щелкните ЗДЕСЬ, чтобы подробнее узнать об оценке «R».

Консультант факультета должен быть уведомлен до изменения статуса курса.

• Студентам не разрешается повторно регистрироваться на курс для повышения буквенной оценки. (Единственным исключением является оценка F, которая должна быть утверждена преподавателем, директором факультета магистерской программы и Высшей школой искусств и наук. Вторая оценка будет использоваться для определения окончания, — исходная буква «F» останется в стенограмме и повлияет на совокупный средний балл, отображаемый в стенограмме.)

* Сроки для полусеместровых курсов отличаются от полносеместровых курсов. Полусестровые курсы должны быть прекращены в течение первых двух недель. Крайний срок для изменения оценки за полсеместровый курс на «Успешно / Неудачно» — это первый день пятой недели курса. Курсы Core ЗАПРЕЩАЮТСЯ для получения баллов Pass / Fail или R.

Летняя регистрация

Летняя сессия : Занятия предлагаются студентам по программе MA Statistics Program через SPS (Школа профессиональных исследований).

Классы, которые засчитываются для выпуска

• Требуется регистрация ER (студент очной формы обучения).
• Требовать регистрацию соответствующей фракции RU (студент-заочник с менее чем 2 заполненными RU).
• Может быть утвержденных факультативов от Департамента статистики или других школ или отделов. Пожалуйста, прочтите о перекрестной регистрации.

Развитие карьеры и другие классы

Вопросы о регистрации на летние курсы в SPS можно присылать по адресу: summersessions @ columbia.edu.

Чтобы отказаться от последнего урока лета, заполните форму отказа .

Постоянная регистрация и отпуск

Все студенты, занятые полный или неполный рабочий день, должны регистрироваться каждый осенний и весенний семестр до тех пор, пока не будут выполнены все требования к получению степени или пока не будет достигнут крайний срок для получения степени. См. Непрерывная регистрация и удовлетворительный академический прогресс. Студенты, которые вынуждены прервать учебу по веским причинам, должны запросить отпуск, заполнив форму на этой СТРАНИЦЕ.GSAS ответит на запрос.

GSAS позволяет студентам-заочникам пройти до четырех лет для получения степени. Все студенты-заочники должны постоянно регистрироваться на каждый осенний и весенний семестр. Форму отпуска необходимо заполнить, если студент, работающий неполный рабочий день, не посещает занятия в течение осеннего или весеннего семестра. Пожалуйста, просмотрите информацию ЗДЕСЬ.

иностранных студентов должны получить степень магистра в течение трех семестров после дневной регистрации. Отпуск может помешать возможности претендовать на OPT.Пожалуйста, свяжитесь с ISSO для получения подробной информации.

Студенты, желающие вернуться из любого утвержденного отпуска — личного, медицинского или военного — должны заполнить форму возврата из отпуска по крайней мере за несколько недель до возвращения в программу.